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碱烧伤致新西兰兔眼角膜机械损伤模型

模型建立

动物品系:新西兰兔。

造模方法:生理盐水冲洗结膜囊,将8 mm直径滤纸片直接浸泡于1 mol/L NaOH溶液中15 s,置于兔左眼眼角膜正中50 s后取下,迅速用约20 ml生理盐水冲洗角膜及结膜囊,即刻氧氟沙星滴眼液滴眼,连续滴眼3次。

检测指标:裂隙灯检查,角膜新生血管面积


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碱烧伤致新西兰兔眼角膜新生血管的影响

角膜本身无血管,毛细血管网围绕角膜缘,如果血管超越角膜缘进入透明区即为病理性。新生血管结构和功能不完善,容易发生血浆渗漏,造成角膜水肿、脂质沉着以及激发的角膜瘢痕化,严重影响视力,也使角膜移植排斥反应的发生率大大增加。


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角膜新生血管面积(mm2)

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*同一时间点各组与模型对照组比较有统计学差异(P< 0.05)


角膜新生血管长度(mm)

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*同一时间点各组与模型对照组比较有统计学差异(P< 0.05)


角膜区域VEGF表达强度和累计面积评分


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角膜FITC-Lectin4免疫组化是如何做的,其中角膜FITC-Lectin4是什么?


角膜FITC-Lectin4免疫组化是一种用于检测角膜内血管生成的方法其中FITC是一种荧光素Lectin4是一种能与血管内皮细胞特异性结合的蛋白质2 

具体操作步骤如下:

1.取出角膜标本,用生理盐水冲洗,切成适当大小。

2.用甲醛固定角膜标本15分钟,然后用PBS洗涤3次。 

3.用0.5%的Triton X-100处理角膜标本10分钟,以增加细胞膜的通透性。

4.用PBS洗涤3次,然后在PBS中加入10%的正常羊血清封闭非特异性结合位点30分钟。 

5.用PBS洗涤3次,然后加入FITC-Lectin4(稀释比例为1:100)孵育1小时。 

6.用PBS洗涤3次,然后在暗处观察和拍摄荧光图像。